Subiect: Biocompatibilitate - ajutor cu lucrarea?
Salut!
Sunt Simona, masterandă la Bioinginerie. Lucrez la disertație și am ales ca temă biocompatibilitatea materialelor pentru implanturi dentare, dar sincer, mă simt un pic depășită de situație.
Am ajuns la partea de analiză a datelor in vitro și mă lupt cu interpretarea rezultatelor testelor de citotoxicitate. Am folosit MTT assay și am niște valori care... nu prea se leagă cu ce așteptam. Am verificat protocolul de vreo 10 ori, am refăcut calculele, dar tot nu înțeleg de ce celulele nu răspund așa cum ar trebui.
A mai pățit cineva să aibă probleme cu interpretarea rezultatelor MTT? Sau poate cineva care lucrează cu materiale biocompatibile și ar putea să-mi dea o perspectivă diferită?
Coordonatoarea mea e super ocupată acum cu alte proiecte și nu prea am timp să stau să discutăm în detaliu. Mă gândeam dacă există vreo resursă online, vreun articol sau un forum (în afară de ăsta, evident) unde s-ar putea să găsesc răspunsuri.
Mulțumesc anticipat pentru orice ajutor!
Salut Simona,
Te înțeleg perfect! Biocompatibilitatea e un domeniu fascinant, dar și plin de capcane, mai ales când vine vorba de interpretarea datelor in vitro. MTT assay-ul poate fi sensibil la o grămadă de factori, și e ușor să te pierzi în detalii.
Și eu am lucrat cu MTT în timpul masteratului, tot pe materiale pentru implanturi (dar oftalmice, nu dentare). Am avut și eu o perioadă în care rezultatele păreau complet contradictorii. Câteva lucruri pe care le-am verificat și care s-au dovedit utile:
* Viabilitatea celulelor de control: E crucial să ai o viabilitate bună a celulelor de control (cele fără material). Dacă viabilitatea lor e sub 85-90%, e posibil să ai probleme cu assay-ul în sine, nu neapărat cu materialul.
* Soluția MTT: Verifică dacă soluția MTT e proaspătă și dacă e stocată corect (întuneric, la -20°C). Se degradează destul de repede.
* Durata de incubare: Ai respectat exact durata de incubare cu MTT? O diferență mică poate afecta rezultatele.
* Solventul de dizolvare: Ce solvent folosești pentru a dizolva formazanul? Uneori, diferențe în compoziția solventului pot influența absorbția.
În legătură cu resurse online, pe lângă articolele științifice (căutări pe PubMed cu "MTT assay troubleshooting" te pot ajuta), recomand și forumul ResearchGate. E plin de oameni care lucrează în domenii similare și sunt dispuși să ajute. De asemenea, caută pe Google Scholar protocoale detaliate pentru MTT assay, poate găsești variații care să te ajute să înțelegi mai bine ce se întâmplă.
Dacă vrei să-mi spui mai multe despre materialul tău, despre tipul de celule folosite și despre valorile obținute, poate pot să-ți dau o părere mai concretă. Nu ezita să detaliezi!
Succes cu disertația!
Adina Dragomir.
Salut Adina,
Îți mulțumesc enorm pentru răspunsul detaliat! Mă simt deja mai puțin pierdută. Ai dreptate, biocompatibilitatea e fascinantă, dar și extrem de complicată.
Am verificat toate punctele pe care le-ai menționat. Viabilitatea celulelor de control a fost constant peste 95%, deci acolo cred că e ok. Soluția MTT e proaspătă, am deschis una nouă acum o săptămână și o țin la -20°C, exact cum ai spus. Durata de incubare a fost respectată cu strictețe, am cronometrat-o de fiecare dată. Solventul de dizolvare e DMSO, standard, dar o să verific și compoziția exactă, poate e de acolo problema.
Materialul pe care îl testez e titan modificat cu un strat de hidroxiapatită, iar celulele folosite sunt osteoblaste umane (linia celulară MG-63). Practic, am testat concentrații diferite de material (nanoparticule de titan și hidroxiapatită) și am observat că, în loc să scadă viabilitatea celulelor odată cu creșterea concentrației (ceea ce mă așteptam, având în vedere că e un test de citotoxicitate), viabilitatea a rămas constantă sau chiar a crescut ușor la concentrații mai mari. E complet contraintuitiv!
Am încercat să caut pe ResearchGate, dar sunt atât de multe informații încât mă simt și mai copleșită. O să încerc să fiu mai specifică în căutări, folosind și termenii pe care mi i-ai sugerat ("MTT assay troubleshooting").
Dacă ai lucrat cu titan și hidroxiapatită, poate ai vreo idee despre ce ar putea să se întâmple. Poate interacționează cumva cu celulele într-un mod neașteptat? Sau poate e o problemă cu modul în care se depun nanoparticulele și asta afectează rezultatele?
Încă o dată, mulțumesc mult pentru ajutor! Apreciez enorm timpul și sfaturile tale.